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對(duì)hplc色譜柱的了解有多深?

更新時(shí)間:2022-01-18      點(diǎn)擊次數(shù):1428
  hplc色譜柱由柱管、壓帽、卡套(密封環(huán))、篩板(濾片)、接頭、螺絲等組成。柱管多用不銹鋼制成,壓力不高于70Kg/cm2時(shí),也可采用厚壁玻璃或石英管,管內(nèi)壁要求有很高的光潔度。為提高柱效,減小管壁效應(yīng),不銹鋼柱內(nèi)壁多經(jīng)過拋光。也有人在不銹鋼柱內(nèi)壁涂敷氟塑料以提高內(nèi)壁的光潔度,其效果與拋光相同還有使用熔融硅或玻璃襯里的,用于細(xì)管柱。色譜柱兩端的柱接頭內(nèi)裝有篩板,是燒結(jié)不銹鋼或鈦合金,孔徑0.2-20um(5-10um),取決于填料粒度,目的是防止填料漏出,柱內(nèi)徑一般是根據(jù)柱長(zhǎng)、填料粒徑和折合流速來確定,目的是為了避免管壁效應(yīng)。
  色譜柱了解
  1)平均顆粒度,顆粒度分布顆粒度(dp)越小:柱效越高(傳質(zhì)好,渦流擴(kuò)散小)柱壓越高(滲透性差)顆粒分布
  顆粒分布越寬∶柱效低(滲透性差)
  顆粒形狀球型∶柱效高、重現(xiàn)性好、柱床結(jié)構(gòu)均勻
  無定型:柱床結(jié)構(gòu)不均勻流動(dòng)相線性速度不均勻,譜帶擴(kuò)展
  2)鍵合相化學(xué)
  1.影響化合物的分離度
  2.不同鍵合相對(duì)不同種類的化合物分離不同
  3.可能導(dǎo)致色譜的分離機(jī)理不同如:C18、C8、CN
  3)含碳量
  1.含碳量越高,k‘值越大(固定相傳質(zhì)效應(yīng)增加)
  2.高含碳量 有利于不易保留的化合物的分離、水解穩(wěn)定性好,重現(xiàn)性好、有利于極性化合物的拖尾改善
  3.低含碳量 有利于分析中性及堿性化合物、降低溶劑損耗、填料的端基封口、封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  4)填料的端基封口
  hplc色譜柱封口殘余硅羥基、減少不可逆吸附或拖尾、增加碳含量(0.1%-1%)
  5)硅膠的活性
  主要影響堿性化合物的保留行為:k':生產(chǎn)硅膠時(shí)處理溫度不同,硅膠活性也不同,是選擇性差異的主要來源,硅膠的雜質(zhì)含量,重金屬含量低,硅羥基活性小,拖尾減小,是色譜柱質(zhì)量好壞的重要標(biāo)志,填料的穩(wěn)定性,硅膠填料,pH:2-8,聚合物填料,pH:2-12,pH值小于2時(shí),鍵合相水解,液相色譜法能否將某一樣品*分離,主要取決于色譜柱的選擇性和柱效,這在很大程度上取決于固定相的選擇是否適當(dāng)。
  6)色譜柱的規(guī)格:內(nèi)徑、檢測(cè)的靈敏度、樣品的容量
  長(zhǎng)度、分離度,理論塔板數(shù)、速度、樣品的容量、檢測(cè)的靈敏度
  7)柱性能評(píng)價(jià):購買的色譜柱,使用前都要對(duì)其性能進(jìn)行考察,使用期間或放置一段時(shí)間后也要重新檢查。柱性能指標(biāo)包括在一定實(shí)驗(yàn)條件下(樣品、流動(dòng)相、流速、溫度)下的柱壓、理論塔板高度和塔板數(shù)、對(duì)稱因子、容量因子和選擇性因子的重復(fù)性,或分離度。一般說來容量因子和選擇性因子的重復(fù)性在±5%或±10%以內(nèi)。進(jìn)行柱效比較時(shí),還要注意柱外效應(yīng)是否有變化。
  一份合格的hplc色譜柱評(píng)價(jià)報(bào)告應(yīng)給出柱的基本參數(shù),如柱長(zhǎng)、內(nèi)徑、填料的種類、粒度、色譜柱的柱效、不對(duì)稱度和柱壓降等。
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